Phleomycin 腐草霉素

產品說明：

使用說明：

溫馨提示：

1）細胞對腐草霉素的敏感性受pH值影響，如pH值越高，敏感性越高；另外，對于高滲透壓培養基如原生質體再生用的培養基，腐草霉素的活性會明顯降低2-3倍。因此也可能通過使用低鹽培養基來降低腐草霉素使用量。

2）使用前，需將低溫存放的腐草霉素置于室溫回溫，之后低速充分混勻。

操作步驟

1. 大腸桿菌

攜帶bleomycin抗性基因如Sh ble，Tn5的質粒，一旦轉化進入大腸桿菌受體菌如HB101，DH5a，MC1061，賦予其腐草霉素抗性。

腐草霉素抗性的轉化子可以在添加5 μg/mL Phleomycin的低鹽LB瓊脂培養基（Yeast extract 5 g/L，Tryptone 10 g/L，NaCl 5 g/L，Agar 15 g/L，pH 7.5）中進行篩選。加有腐草霉素的平板可于4℃穩定保存1個月。

2. 酵母菌

釀酒酵母的腐草霉素抗性轉化子可在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD培養基中進行篩選。

實驗步驟：按常規方法進行酵母細胞轉化，一旦DNA進入細胞后，用YEPD培養基稀釋細胞并置于搖床上培養6 h或過夜，使其抗性性狀得以表達。之后將細胞冰浴1 h并涂布培養在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD（pH 7.0）固體培養基上。

3. 真菌

根據轉化子對Phleomycin 的敏感性不同，在添加有10-50 μg/mL腐草霉素的再生培養基內進行篩選。先將細胞在4℃孵育過夜然后置于生長溫度培養，可提高其對抗生素的敏感性。

4. 植物細胞

根據植物類型不同，選擇5-25 μg/mL Phleomycin進行轉化子篩選。

5. 哺乳動物細胞

5-50 μg/mL Phleomycin，推薦先通過建立滅殺曲線來確定最佳濃度。與G418做比較，可能需要更長的時間來殺死細胞或者使細胞從平板上脫落，尤其當細胞處于高密度的情況。

依細胞系不同，通常需要5~21天來挑選具腐草霉素抗性的穩定轉染細胞。

注意事項：

1. 腐草霉素對濃酸較為敏感，但可短時間暴露于稀酸中。使用前將本品回溫至室溫，并輕輕混勻。

2. 腐草霉素有毒，避免直接接觸皮膚，不可吞服。酸性或堿性pH，或次磷酸鈉中會即刻失效。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。