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產品描述：

XYIzol Reagent是一種即用型且操作迅捷的總RNA抽提試劑，適用樣本廣泛，包括人、動物、植物、酵母或細菌來源的細胞和組織樣本。本品是一種含酚、異硫青酸胍和其他專利成分的單相溶液，有利于抽提分子量大小不一的各種RNA類型。能夠良好的維持RNA完整性，因能高效抑制樣本勻漿過程中細胞破損和細胞組分溶解時釋放的RNase活性。XYIzol Reagent能夠同時處理大量樣本，且以優化的方式一步法提取RNA，整個過程可在一小時內完成。

分離的總RNA無蛋白質和DNA污染，適用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、poly(A）+篩選、體外翻譯、RNase保護分析和分子克隆等下游實驗。

使用說明：

1、需自行準備的材料

水浴鍋

異丙醇

75%乙醇

含0.5%SDS的RNase-free水或DEPC處理水（可選：RNase-free的糖原）

2、樣品的制備

當樣品富含蛋白質，脂肪，多糖或是細胞外物質例如肌肉，脂肪組織和植物的塊莖部分時可能需要一額外的分離步驟。勻漿化后在2—8°C的條件下以12,000×g的離心力離心10分鐘，移除勻漿中不溶解的物質，余下的沉淀中包含有細胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，而上層的超浮游物含有RNA。在來自于脂肪組織的樣品中，大量的脂肪漂在最上層因而應該除掉。在每一個個案中，將清亮的勻漿溶液轉移到一干凈的試管中加入氯仿并繼續進行下述的分離步驟。

3、分離階段

將勻漿樣品在15—30°C條件下孵育5分鐘以使核蛋白體完全分解。每1 ml XYIZOL加0.2 ml氯仿。蓋緊樣品管蓋，用手用力搖晃試管15秒并將其在30°C下孵育2—3分鐘。在2—8°C下以不超過12,000×g的離心力高速冷凍離心15分鐘。離心后混合物分成三層：下層紅色的苯酚-氯仿層，中間層，上層無色的水樣層。RNA無一例外地存在于水樣層當中。水樣層的容量大約為所加XYIZOL容量的60%。

4、 RNA的沉淀

將水樣層轉移到一干凈的試管中，如果希望分離DNA和蛋白，有機層同樣要予以保留。通過將水樣層和異丙醇混合來沉淀RNA。最初均化時的每1 ml XYIZOL對應0.5 ml異丙醇。將混合的樣品在15—30°C條件下孵育10分鐘并在2—8°C下以不超過12,000×g的離心力高速冷凍離心10分鐘。RNA沉淀在離心前通常不可見，形成一膠狀片狀沉淀附著于試管壁和管底。

5、RNA的洗脫

移去上層懸液。用75%的乙醇洗滌RNA沉淀一次，每1 ml的 XYIZOL至少加1 ml的75%乙醇。旋渦振蕩混合樣品并在2—8°C下以不超過7,500×g的離心力高速冷凍離心5分鐘。

6、RNA的再溶解

在操作的最后，簡單干燥RNA沉淀（空氣干燥或真空干燥5—10分鐘）不要在真空管里離心干燥RNA。尤為重要的是，不能讓RNA沉淀完全干燥那樣會極大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA樣品其A260/280比值< 1.6。用移液管尖分幾次移取無RNA酶的水或0.5% SDS溶液來溶解RNA，并在55—60°C下孵育10分鐘（當RNA以后要用于酶切反應時，避免使用SDS。）RNA還能被100%甲酰胺（除去離子）再溶解并保存在–70°C。

注意事項：

1）所有離心管、槍頭以及相關溶液都必須無RNase污染。對于塑料制品、玻璃和金屬器皿、實驗儀器等可使用懋康生物的固相RNase清除劑去除RNase，或者用含0.01%DEPC的去離子水浸泡過夜，之后高壓滅菌、烘干。對于實驗溶液可使用懋康生物的液相RNase清除劑來處理或用DEPC處理水來配制。

2）對新鮮組織或細胞樣本的抽提效果通常優于凍存的組織或細胞，由于組織或細胞凍融過程中可能存在一些RNase釋放出來并酶切樣品。若是不能及時抽提RNA，推薦先加入適量XYIzol Reagent，之后裂解樣品后再凍存。

3）XYIzol Reagent含有毒物質，請在操作過程中注意好防護工作，戴好手套和護眼罩，避免皮膚接觸。在通風櫥內完成操作，避免呼吸道吸入。

4）保存：2-8℃保存，有效期一年

5）運輸：冰袋運輸

本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。