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產(chǎn)品說明：

產(chǎn)品組分：

使用說明：

產(chǎn)品描述：

Alkaline Phosphatase，中文名堿性磷酸酶，可將DNA、RNA的5’端磷酸基團(tuán)去除，常用于阻止載體的自連作用：在分子克隆實(shí)驗(yàn)中，DNA連接酶催化DNA連接時(shí)需要有磷酸基團(tuán)的存在，載體在經(jīng)酶切后會(huì)在切點(diǎn)端保留一個(gè)磷酸基團(tuán)。而載體經(jīng)堿性磷酸酶去磷酸化后因5’端無磷酸基團(tuán)，因而不可以和自身3’端連接。因此連接反應(yīng)中載體本身會(huì)優(yōu)先發(fā)生的連接反應(yīng)被阻止，提高了目的片段插入率。另外，堿性磷酸酶還可制備用于5’端標(biāo)記的DNA模板，以及用于該酶蛋白的脫磷酸作用等。

本品為小牛腸來源的堿性磷酸酶，可以降解幾乎所有磷酸單酯，但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。

使用方法

1 DNA去磷酸化

① 在1.5 mL離心管中加入下列試劑：

【*】單鏈DNA或含5’端突出末端的DNA推薦低溫下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建議在較高溫度下孵育。

②混勻上述試劑，于37℃或50℃孵育30 min。或者37℃孵育15 min后，再于50℃孵育15 min。

2 酚氯仿法抽提DNA

① 苯酚/氯仿/異戊醇（25:24:1）抽提2次。

【注】推薦在酚提取前將其在含5 mM EDTA，0.5% SDS，50 μg/mL Proteinase K的溶液中56℃孵育30 min以徹底滅活堿性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10 min，滅活效果更佳。

② 氯仿/異戊醇（24:1）抽提。

3 乙醇沉淀DNA

① 加入2.5 μL 3 M NaCl（終濃度150 mM）。

② 加入125 μL（2.5倍體積）預(yù)冷乙醇，混勻后于-20℃放置30-60 min，沉淀DNA。

4 溶解DNA

離心，徹底去除乙醇后，將DNA溶于適量去離子水（＜20 μL）。

注意事項(xiàng)：

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并帶一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。