Hematoxylin 蘇木素（蘇木精）
蘇木素（Hematoxylin） 是組織學與病理學中最核心的堿性染料，專用于細胞核染色，常與伊紅（Eosin）聯用組成經典 HE 染色，是生物實驗室必備試劑。
一、產品基本信息
1. 基礎參數
- 中文名稱：蘇木素 / 蘇木精 / 蘇木色精
- 英文名稱：Hematoxylin
- CAS 號：517-28-2
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分子式：
- 無水：（分子量 302.28）
- 三水合物：（分子量 356.33）
- 外觀性狀：白色 / 淺黃 / 淺棕色結晶，光照 / 空氣下逐漸變紅棕色
- 溶解性：易溶于熱乙醇、熱水；微溶于冷水、甘油；溶于堿、氨溶液
- 純度：≥95%
2. 核心特性（染色原理）
蘇木素本身無染色能力，需經氧化生成 蘇木紅（Hematein） 才具發色性（“成熟”）。
- 蘇木紅為堿性陽離子染料，特異性結合細胞核內 DNA/RNA（酸性物質）
- 染色后：細胞核呈藍紫色 / 紫黑色，與伊紅（胞質紅）形成鮮明對比
- 需媒染劑（鋁鹽、鐵鹽）增強著色力與穩定性
3. 主要用途
- 組織學 / 病理學：HE 染色（細胞核染色）
- 細胞生物學：細胞爬片、涂片核復染
- 指示劑：pH 5.0（黃）～6.0（紫）；強酸（粉紅）～強堿（綠）
- 金屬檢測：定性 / 定量測定 Cu、Fe、V、Al、Sn 等
二、常用蘇木素染液配制（以經典 Ehrlich 為例）
Ehrlich 蘇木素（成熟型，常用）
- 蘇木素：1 g
- 無水乙醇：100 mL
- 硫酸鋁鉀（媒染）：20 g
- 蒸餾水：100 mL
- 甘油：30 mL（防氧化、延長壽命）
- 冰醋酸：5 mL（促分化、控色調）
- 碘酸鈉（氧化劑）：0.2 g（加速成熟，即配即用）
配制步驟
- 蘇木素溶于乙醇 → 完全溶解
- 硫酸鋁鉀溶于熱水 → 冷卻
- 兩液混合 → 加甘油、冰醋酸
- 加碘酸鈉 → 攪拌氧化（即刻成熟）
- 棕色瓶避光保存，有效期 3～6 個月
Mayer 蘇木素（改良型，溫和、少分化）
- 蘇木素：1 g
- 蒸餾水：1000 mL
- 硫酸鋁鉀：50 g
- 碘酸鈉：0.2 g
- 水楊酸鈉（防腐）：1 g
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冰醋酸：10 mL
特點：染色溫和、背景干凈，無需鹽酸分化，適合新手
三、標準使用流程（HE 染色核染色步驟）
1. 切片前處理（石蠟切片）
- 脫蠟水化：二甲苯（2×5 min）→ 無水乙醇 → 95% → 85% → 75% → 蒸餾水（各 1～2 min）
- 自來水洗：1 min（促染液滲透）
2. 蘇木素染色（核心）
- 浸入蘇木素染液：3～8 min（室溫；舊液 / 低溫可延長至 10～15 min）
- 自來水速洗：10～20 s（去浮色）
3. 分化（去非特異著色）
- 分化液：1% 鹽酸酒精（70% 乙醇 + 1% 濃鹽酸）
- 操作：浸 1～3 秒 → 立即自來水沖洗（鏡下控：核清晰、胞質淡粉）
- 現象：染色由藍 → 紅 → 水洗返藍
4. 返藍（關鍵）
- 流動自來水沖洗：10～15 min（核由紅 → 穩定亮藍）
- 或用：溫水（40℃）、稀氨水、Scott 液（促返藍）
5. 后續（HE 完整流程）
- 伊紅染色（胞質）：1～3 min
- 梯度脫水 → 透明 → 封片
四、關鍵注意事項
1. 染液質量控制
- 成熟度：新配未氧化 → 染色弱；氧化過度（表面有膜、沉淀）→ 背景臟、顆粒多
- 保存：棕色瓶、密封、避光、室溫；出現沉淀過濾后再用
2. 常見問題與解決
- 核染色過淺：染液老化 / 氧化不足 → 延長時間或補氧化劑
- 核深、背景臟：染色過久 / 分化不足 → 縮短時間、延長分化
- 核不藍、偏紅：返藍不足 → 延長流水沖洗或用返藍液
3. 安全與儲存
- 刺激性：避免接觸皮膚 / 黏膜，戴手套、通風操作
- 儲存：避光、密封、干燥陰涼處；遠離強氧化劑
