CellROX Green Reagent, for oxidative stress detection 氧化應激檢測用探針（綠色）

產品描述：

CellROX Green Reagent是一種檢測活細胞氧化應激的新型熒光探針。此細胞膜滲透性的染料在還原態時無熒光或呈微弱熒光，一旦被活性氧物質（ROS）氧化并結合到DNA后發明亮穩定的綠色熒光，最大吸收/發射波長約~485/520 nm（見圖I. CellROX Green氧化后的熒光光譜圖）。其熒光信號主要定位在細胞核和線粒體。此染料能夠被甲醛固定且能承受表面活性劑處理，因此，特別適合與其他兼容性染料和抗體進行多重標記檢測。CellROX Green Reagent與各種檢測平臺兼容，比如傳統熒光顯微鏡、高內涵篩選儀器（HCS）、流式細胞儀、熒光酶標儀或高通量篩選（HTS）。還與各種臺式儀器兼容，比如FLoid?，Tali?，和Attune?儀器。

圖1. CellROX Green氧化后的熒光光譜圖

本品以穩定、即用型的DMSO溶液形式提供，濃度為2.5mM，操作簡單，勿需清洗，與熒光顯微鏡的標準工作流程兼容。每管染料（50μl）足夠做1個96孔板或20張爬片。適用于任何細胞類型的氧化應激檢測。

保存與運輸方法

保存：≤-20oC避光保存，保持干燥，1年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）   本品對光和空氣敏感，使用過程中切記不可長時間敞開瓶蓋。當瓶子開口后建議丟掉未用完的材料。

2）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.     需要自行準備的材料

1.1    細胞和培養基

1.2    生理鹽緩沖液（PBS，pH 7.2-7.6）

1.3    【可選】固定劑（比如，溶于PBS的3.7%甲醛）

1.4    【可選】破膜劑（比如，0.5% Triton X-100）

2.     實驗步驟

以下步驟專門為BPAE，HepG2, U-2 OS和RAW巨噬細胞所開發，優化后的染色工作濃度為5μM，但是此實驗適用于任何細胞類型。生長培養基、細胞密度、細胞類型變化和其他因素可能會影響標記效率。在初始實驗，建議設置濃度梯度，以確定最佳的實驗條件和適合研究細胞類型的工作濃度。

CellROX Green Reagent對光和空氣敏感，使用過程中切記不可長時間敞開瓶蓋。當瓶子開口后建議丟掉未用完的材料。

2.1    用待測化合物或藥物處理細胞，孵育一定時間。【注】：待測化合物或藥物處理后沒有必要去除培養基。

2.2    加CellROX Green Reagent到細胞內使其終濃度為5μM，37℃孵育30min。

2.3    去除培養基，用PBS清洗3次。

2.4    【可選】可用3.7%甲醛固定細胞15min。需在CellROX Green Reagent染色24h內進行熒光信號檢測。

2.5    【可選】此時可用NucBlue活細胞染料（一種細胞核復染劑）或其他復染劑如Hoechst 33342對細胞染色。

2.6    【可選】如果與其他試劑的多重標記實驗要求進行細胞透化，可用0.5% Triton X-100透化處理10min。

應用示例

圖II. CellROX Green Reagent測定牛肺動脈內皮細胞（BPAE）的氧化應激水平。在MatTek激光共聚焦專用玻底培養皿內鋪BPAE細胞。之后用含維生素K3（100μM）或不含維生素K3的培養基37℃處理1h。向某些對照和維生素K3處理孔內加入N-乙酰半胱氨酸（NAC，50μM）。之后細胞用CellROX Green Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，前者加入完全培養基內37℃孵育30min。細胞經PBS清洗后，在Zeiss Axiovert倒置顯微鏡下檢測（40X物鏡）。